原代培養(yǎng)是直接從生物體組織或器官的一部分進行培養(yǎng)，也稱初代培養(yǎng)。腫瘤組織的原代細胞培養(yǎng)技術為腫瘤研究及治療提供充足的細胞來源是癌癥在體外研究的重要工具，與體內(nèi)研究相輔相成。但目前腫瘤細胞原代培養(yǎng)成功率不高的許多問題還需繼續(xù)探討與研究。腫瘤組織的原代細胞培養(yǎng)有哪些注意事項？讓我們一起來看看吧！

注意點一：取材部位的選擇非常重要，應在癌細胞集中、細胞活力較好的部位取材，盡量避免在壞死區(qū)取材；

注意點二：取材后應盡快培養(yǎng)，最好不要超過24h，如需耽擱時間，可將組織塊于培養(yǎng)液中浸泡，放置于冰浴或4℃冰箱；

注意點三：癌組織周圍的血液、脂肪等正常的組織應去除，可以保證癌細胞的純度；

注意點四：取材方法：獲取的組織塊最好能有指尖大小，太小了可能養(yǎng)不起來，因為細胞有生物學環(huán)境，細胞多了長得也會快，如果細胞密度太低了，細胞很難長起來，可能的原因是細胞分泌的生長因子。

注意點五：切碎癌組織時，可用眼科剪，也可用小刀，避免用大剪刀，所用刀剪要鋒利，以免挫傷細胞。

注意點六：分散細胞的方法：機械和藥物兩種方法。癌組織不同與正常組織，單純用機械的剪碎辦法，癌細胞就可以游離出來，成為細胞懸液。常用胰蛋白酶、EDTA消化分離。如果從含有大量堅硬的結締組織分離癌細胞，膠原纖維不能被胰蛋白酶和EDTA消化，則使用膠原蛋白酶消化，如：原代黑色素瘤細胞，黑色素瘤一般長在肢端，肢端的角質層太厚，就需要膠原蛋白酶消化。

注意點七：接種數(shù)量要足夠，造成培養(yǎng)細胞所必須的生物學環(huán)境；

注意點八：更換培養(yǎng)液的時可換半量或1/4量，將pH維持在7.2-7.4；

注意點九：新配試劑要做無菌實驗，嚴格無菌操作，防止污染，新手建議不要直接養(yǎng)原代，先拿實驗室的腫瘤細胞養(yǎng)養(yǎng)練練手；

注意點十：若組織在消化時間較長時仍未散開，可采用多次提取消化法以減少酶對已消化下來的細胞的損傷；

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