一、DNA是如何提取的？

在2019年之前，使用Qiagen Autopure LS儀器或通過(guò)改良的Miller鹽析法手動(dòng)從新鮮血液、唾液、永生化淋巴細(xì)胞和成纖維細(xì)胞中純化基因組DNA。自2019年1月1日起，gDNA的分離使用自動(dòng)磁珠純化法(Hamilton Microlab STAR利用Promega的ReliaPrep大容量HT分離系統(tǒng))或手動(dòng)使用改良的Miller's鹽析程序。

二、DNA質(zhì)量控制是如何進(jìn)行的？

DNA濃度通過(guò)A260處的分光光度吸光度測(cè)定，使用1O.D.相當(dāng)于50 ug/ml雙鏈DNA的慣例或Oubit dsDNA BR測(cè)定法，一種基于染料的熒光方法，取決于存儲(chǔ)庫(kù)。為了評(píng)估DNA完整性，使用Agilent TapeStation評(píng)估DNA。TapeStation軟件確定DNA完整性數(shù)字（DIN）作為gDNA完整性的度量。

用6個(gè)常染色體微衛(wèi)星標(biāo)記的多重PCR方法驗(yàn)證了DNA樣品的一致性。在同一反應(yīng)中，用一對(duì)額外設(shè)計(jì)的引物擴(kuò)增X染色體和Y染色體釉原蛋白基因之間的等位基因差異區(qū)域來(lái)確定性別。

三、DNA樣本的濃度和體積是多少？

Coriell運(yùn)送的大多數(shù)樣本在300-375 ng/ul之間，但不同的存儲(chǔ)庫(kù)是不同的。每個(gè)DNA樣品的濃度可在隨貨件一起提供的濃度表上找到。請(qǐng)注意，對(duì)于不同的存儲(chǔ)庫(kù)，濃度是由不同的方法確定的。

四、應(yīng)該如何重新測(cè)試DNA濃度？

我們建議使用Nanodrop或傳統(tǒng)的基于cuvelte的分光光度計(jì)，TE作為合適的樣品空白。DNA濃度可以根據(jù)A260值使用1.0 D.相當(dāng)于50ug/ml雙鏈DNA的慣例來(lái)計(jì)算。

Qubit@dsDNA BR測(cè)定（Q32850:ThermoFisher Scientific）也可用于測(cè)定DNA濃度。該測(cè)定使用超靈敏熒光核酸染色，用標(biāo)準(zhǔn)熒光計(jì)和熒光素激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)定量溶液中的雙鏈DNA（dsDNA）。

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